Nola funtzionatzen duen PCR digitala
Nola funtzionatzen duen PCR digitala
Anonim

Hainbeste jakin behar da polimerasa digitalaren erreakzioarekin lotutako ezer eztabaidatzen denean. PCR digitala sarritan aplikatzen da biologia klinikoan laborategiko ingurunean kritiko gisa. Abantaila asko ditu PCR kuantitatiboarekin alderatuta, laginak probatzeko aplikazioen alderdi asko biltzen dituena.

PCR asmakizuna 1980ko hamarkadakoa da, eta orduz geroztik, agente mikrobiologikoak detektatzea ez da inoiz erraza izan. Mikrobiologiaren ikerketa aurreratua teknologia honen aitzindaria izan da aspalditik, eta arlo klinikoan aurrera egiteko tresnarik onena da.

PCR gaur egun mundu osoko laborategi kliniko guztietan dago eskuragarri funtzioak erabat errazteko tresna dedikatuekin. Polimerasaren kate-erreakzio digitalak konplexua dirudi, eta hala da, baina dena dena eraiki zuten hainbat ataletan banatzea da.

Nola funtzionatzen duen PCR digitala

dPCR-k nola funtzionatzen duen ulertzea ezinbestekoa da mikrobiologiako karreran erabili beharko duten langile kliniko guztientzat. qPCR-n eta dPCR-n erabiltzen diren bi metodoak aplikatzen dira prozesuan gertatzen den erreakzio kimikoa aztertzean.

dPCR dagoeneko ezaguna da abantaila asko dituelako emaitzak hobetzerako orduan. Oso sentikorrak diren eta kuantifikazio oso zehatza eskatzen duten sistemen aplikazioa, besteak beste, hobea dela frogatu da dPCR metodologien bitartez.

Pare bat urrats daude dPCR sistema funtzionatzen duten. Hauek garrantzitsuak dira sistemaren funtzionaltasuna behar bezala aplikatzeko eta proiektuaren analisian nahi diren emaitza kuantitatiboak lortzeko.

Komertzialki eskuragarri dauden dPCR sistemak ziurtatuta daude, eta iturri fidagarrietatik kontsulta ditzakezu kontuan hartu beharreko onenak. PCR prozesuek edozein laborategitako lagin klinikoetan azido nukleikoko osagai espezifikoak detektatzeko eta kuantifikatzeko erantzuten dute.

dPCR eta qPCR-k beren desberdintasunak dituzte, eta nahiko interesgarria da nola sortzen dituzten sistemen erreakzio prozesuetatik. dPCR-k hartzen duen ikuspegia analisi esperimentalean zehar lagin zehatz bateko DNA molekula-zenbakien kuantifikazioari buruzkoa da.

DNA anplifikatzeko erreakzioa qPCR-ko koloratzaile fluoreszenteetan sartzen da, baina dPCR-ak zati independente espezifikoen milaka zati ditu. Ataletan banatzen molekula bakarreko erreakzio-nahaste indibidualak dituzten kapilarren edo mikroputzu plaken bidez ikus daitezke.

dPCR Aplikazioak Mikrobiologia Klinikoan

dPCR mikrobiologia klinikoaren saiakuntzaren oinarrian dagoela dirudi, erreakzioak behin eta berriz ustiatzen direlako emaitza zehatzak lortzeko bideak sortzeko. dPCR erabateko kuantifikaziorako estandarrak estandar handiko kalibrazioan eta prozesu osoaren anplifikazio eraginkorrean oinarritzen dira.

Goi-mailako sistemak ezin hobeak dira patogeno jakin baten kargak zehazteko, haien sekuentzietan aniztasuna duten helburuak eta inhibitzaileak dituzten laginak kuantifikatzeko. PCR digitalaren erabilerari esker, RNA eta DNA birusen, parasitoen eta baita bakterioen kopia-kopuruak ere zehaztu ahal izan dira ale kliniko guztietan.

Mutazioak ezinbesteko eremua dira dPCR aplikatzeko prozesuan zehar basati-mota sekuentziarekin detektatzeko gaitasunen bidez. qPCR erabiliz detektatzeko lorpenak ezin dira dPCRrekin alderatu, qPCR-k frogatu baitu edozein alelo mutanteen % 10 gehienez detektatzen duela. Bestalde, dPCR-k asko hobetzen du KRAS gene basatietako milaka mutanteak detektatzea baino.

Gauzatzeko gogoetak

Lehenik eta behin, ezinbestekoa da dPCR inplementazioa zerk egiten duen ziurtatzea eta zein ezarpenetan burutzen den onena. Gaur egun agerikoa da qPCRrekin alderatuta, dPCR-k abantaila zehatzagoak dituela, eta, beraz, dPCR laborategietan ezartzea litekeena da.

Inplementazio-prozedurek dPCR-ren errendimendua qPCR baino hobea dela argi dagoen egoeretan ere erantzun behar dute. Karga birikoa neurtzeko zehaztasun handiko prozesu bat izatea garrantzitsua da norbait ziur egon daitekeen emaitzak aurkitzeko eta ez beste balio batzuekin nahasteko, eta horrek kate-erreakzio osoaren osotasun osoa eragingo luke.

Errendimendu altua adostasun-helburuak areagotzeko ere erabiltzen da adostasun-primer bidez, lagin-probak inhibitzaileekin, besteak beste, emaitza zehatzagoak eta zehatzagoak emateko. Beti gomendatzen da dPCR erabiltzea qPCR entseguetarako karakterizazio estandarrak egiteko. Stilla Technologies teknologia honen erabilera hurrengo mailara eramaten duen egungo enpresetako bat da.

PCR teknologia digitalaren aurrerapena aukera ezin hobea da mikrobiologia klinikoan dituen hainbat aplikazioetatik. Desabantaila minimoak ditu. Dakartzan konplexutasunak, jasaten dituen ohiko erreakzio zehatzekin batera, sistemak momentuz ezin dituen abantaila guztiak eta errendimendu handiagoa ematen dizkio.

Teknologia klinikoak aurrera egin ahala, mugak belaunaldi berriko tresnekin konponduko dira industria kliniko osoa iraultzeko. Momentuz, argi dago dPCR sistemen erabilera araua izango dela mikrobiologia diagnostikoko laborategietan mundu osoan.

Gaiaren arabera ezaguna